王启林1 李瑞乾1 金从国2 张国颖1 白 宇1 孟庆印3 雷永虹11.昆明医科大学第三附属医院泌尿外科，云南昆明 650118；2.云南省肿瘤研究所，云南昆明 650118；3.昆明医科大学第三附属医院病理科，云南昆明 650118[摘要] 目的 探讨蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子（CIP2A）在前列腺癌中的表达及意义。 方法 选取昆明医科大学第三附属医院2009年1月～2012年4月手术治疗的前列腺癌患者65例为试验组，选取同期昆明医科大学第三附属医院收治的良性前列腺增生患者65例组织标本为对照组，采用免疫印迹（Western blot）的方法对两组CIP2A的表达情况进行比较，并分析CIP2A的表达与临床病理因素的关系。 结果 CIP2A在试验组中的阳性表达率为64.62%（42/65），在对照组中阳性表达率为29.23%（19/65），两组进行比较，差异有统计学意义（P < 0.05）；所有患者随访1年，CIP2A的阳性表达与术后1年肿瘤转移复发、分化程度、临床分期、术前血清中PSA水平有关（P < 0.05）。 结论 CIP2A有望成为前列腺癌早期诊断、预测复发转移及预后评价的一个重要的生物学指标。

　　[关键词] 前列腺癌；蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子；生物学指标[中图分类号] R737.25 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2014）03（c）-0045-03Expression and clinical significance of CIP2A in prostate cancerWANG Qilin1 LI Ruiqian1 JIN Congguo2 ZHANG Guoying1 BAI Yu1 MENG Qingyin3 LEI Yonghong11.Department of Urology， the Third Affiliated Hospital of Kunming Medical University， Yunnan Province， Kunming 650118， China； 2.Cancer Research Institute of Yunnan Province， Kunming 650118， China； 3.Department of Pathology， the Third Affiliated Hospital of Kunming Medical University， Yunnan Province， Kunming 650118， China[Abstract] Objective To explore the expression and clinical significance of CIP2A in prostate cancer. Methods 65 cases of prostate cancer patients from January 2009 to April 2012 in the Third Affiliated Hospital of Kunming Medical University were selected as experiment group； 65 patients with benign prostatic hyperplasia tissue in the same term in the Third Affiliated Hospital of Kunming Medical University were selected as control group. the CIP2A expression of two groups was compaed by Western blot method， the relationship of the CIP2A expression and clinical pathological factors were analyzed. Results CIP2A positive expression rate in experiment group was 64.62% （42/65）， the positive expression rate in control group was 29.23% （19/65）， the difference was statistically significant （P < 0.05）。 All the patients were followed up for 1 year， the relationship between the expression of CIP2A and the degree of differentiation， clinical stage， preoperative serum PSA levels were found， the differences were statistically significant （P < 0.05）。 Conclusion CIP2A is expected to become an important biological indicator of the early diagnosis of prostate cancer， recurrence， metastasis and prognosis evaluation.

　　[Key words] Prostate cancer； Cancerous inhibitor of protein phosphatase 2A； Biological indicators前列腺癌是威胁男性健康的一种常见的泌尿生殖系统肿瘤[1]。有资料显示，前列腺癌在欧美国家的发病率较高，约为124.8/10万，我国为1.6/10万，但随着人们生活方式的改变和诊断水平的提高，我国前列腺癌发病率呈上升趋势[2]。临床上通常采用血清前列腺特异性抗原（PSA）检测和穿刺活检病理检查进行确诊，但对早期微小病灶的预测能力较弱，因此需要一个新的分子标志物来对早期前列腺癌进行早期诊断是目前研究的热点和重点[3]。本研究旨在探讨蛋白磷酸酶2A癌性抑制因子（CIP2A）在前列腺癌组织中的表达情况及其与临床病理之间的关系，现报道如下：

　　1 资料与方法1.1 一般资料选择昆明医科大学第三附属医院2009年1月～2012年4月手术治疗的前列腺癌患者65例作为试验组，年龄51～79岁，平均（63.8±6.2）岁，其中42例患者标本来自经尿道前列腺电切术，23例患者经穿刺活检病理证实后行耻骨上前列腺癌根治术；所有患者均未进行放化疗及激素和外科去势治疗。选取同期昆明医科大学第三附属医院治疗的良性前列腺增生患者65例的组织标本作为对照组，年龄52～83岁，平均（63.1±5.8）岁，所有标本是由经尿道前列腺电切术获得；获取后标本于15 min内-80℃的冰箱内保存。标本的分离和使用都分别通过医院伦理审查委员会的批准。

　　1.2 方法65例前列腺癌标本均采用免疫印迹（Western blot）法进行CIP2A的测定，取前列腺癌组织匀浆，加入裂解液孵育4℃，10 min。以12 000 r/min，4℃，离心10 min，取上清。将蛋白上清溶于5×SDS上样缓冲液，95℃，水浴10 min，各取上清30 μg进行10% SDS-PAGE电泳。电泳结束后用湿转法将样品转移至PVDF膜。将PVDF膜放入含有5% BSA的TBS/T中，4℃包被过夜。抗体孵育。将膜置于ECL显色液中，室温避光孵育1 min。压片、曝光、显影。实验中设不加一抗的空白对照组，实验重复5次。以α-Tubulin作为内参。图像以GS800 Calibrated Densitometer 扫描仪进行灰度扫描。所有标本常规制作HE染色。HE染色后由2名病理科医师共同阅片进行Gleason分级。按照分化程度分为5级即Gleason分级（1～5）分，将肿瘤细胞的主要成分和次要成分别记分，高分化为2～4分，中分化5～6分，亚低分化7分，低分化为8～10分。所有患者入院后抽取血样本，采用免疫荧光法进行测定PSA，并对所有患者通过门诊复查进行随访1年。

　　1.3 临床分期标准根据Whitmore-Jewett分期标准进行分期：A期：患者无临床症状，仅通过病理检查发现癌细胞；B期：肿瘤限于前列腺内，伴有临床表现；C期：肿瘤穿透前列腺被膜；D期：出现前列腺癌转移。

　　1.4 观察指标采用半定量方法判读免疫组织化学染色结果。阳性结果为分布于细胞质、细胞膜以及核周的比较鲜明的棕黄色着色，阴性结果为均一、非特异的较浅的着色。每张切片随机选取10个高倍视野（400×），每个视野计数100个细胞，判断阳性细胞的染色强度和计数阳性细胞的百分率。染色强度评分如下：0分为无染色，1分为淡黄色，2分为棕黄色，3分为棕褐色；阳性细胞百分率评分如下：1分为≤10%，2分为>10%～30%，3分为>30%～50%，4分为>50%。最终染色结果取两者乘积：0分为阴性（-）；1～2分为弱阳性（+）；3～4分为中等阳性（++）；>4分为强阳性（+++）。

　　1.5 统计学方法采用统计软件SPSS 18.0对数据进行分析，正态分布计量资料以均数±标准差（x±s）表示。计数资料以率表示，采用χ2检验。以P < 0.05为差异有统计学意义。

　　2 结果2.1 CIP2A在试验组和对照组中的表达情况CIP2A在试验组中的阳性表达率为64.62%（42/65），在对照组中的阳性表达率为29.23%（19/65），两组进行比较，差异有统计学意义（χ2=16.3388，P < 0.05）。见表1。

　　表1 CIP2A在试验组和对照组中的表达情况（例）注：CIP2A：蛋白磷酸酶2A癌性抑制因子2.2 前列腺癌组织中CIP2A的表达与临床病理因素的关系所有患者随访1年，根据患者年龄、术后1年肿瘤转移复发、分化程度、临床分期、术前血清中PSA水平进行分析，CIP2A的阳性表达与术后1年肿瘤转移复发、分化程度、临床分期、术前血清中PSA水平有关，差异均有统计学意义（P < 0.05）。见表2。

　　表2 前列腺癌组织中CIP2A的表达与临床病理因素的关系（例）注：PSA：前列腺特异性抗原；CIP2A：蛋白磷酸酶2A癌性抑制因子3 讨论 www.17net.net 论文网前列腺癌的发生是一个长期的多步骤多因素的变化过程，是细胞增殖与细胞死亡相互作用的结果，一旦细胞过度增殖可能导致肿瘤的发生，细胞凋亡受抑制能增强恶性病发生的可能性。

　　最近研究表明[4-5]，CIP2A是新发现的一种致癌因子，它可以干扰抑癌因子蛋白磷酸酶2A（protein phosphatase 2A，PP2A），导致人体细胞无节制地增殖。CIP2A蛋白主要位于人类肿瘤细胞的细胞质。目前研究显示CIP2A基因定位于染色体3q13.13，DNA长度约为38.8 kb，mRNA长为4284 bp，含有21个外显子，有一个编码905个氨基酸的开放读码框（ORF），蛋白质相对分子质量为102 kD，其确切结构仍未被充分认识[6-7]。但已证实其在多种恶性肿瘤中均高表达如乳腺癌、食管癌、胃癌、肝癌、非小细胞肺癌等恶性肿瘤中呈高表达。在多种人良性组织样本中低表达，如结肠、胸腺、脾、子宫、胎盘、甲状腺等[8-9]。

　　本研究结果显示，CIP2A在前列腺癌中的阳性表达率为64.62%（42/65），明显高于在良性前列腺增生的阳性率表达29.23%（19/65），进一步探讨CIP2A的表达与患者年龄、术后1年肿瘤转移复发、分化程度、临床分期、术前血清中PSA水平的关系，结果显示CIP2A的阳性表达与术后1年肿瘤转移复发、分化程度、临床分期、术前血清中PSA水平有关。分化越低，分期越晚，CIP2A的阳性表达率越高。与相关研究结果一致[10-12]。

　　本研究还显示，通过对血清中不同水平PSA值患者的CIP2A水平进行分析，PSA≥10 ng/mL患者的CIP2A的阳性表达明显高于<10 ng/mL患者的阳性率。PSA仍然是目前诊断前列腺癌的主要标志物之一，正常男性血清中PSA<4 ng/mL，当血清PSA>10 ng/mL则高度怀疑患有前列腺癌[13-14]。在此之间往往提示需要进行穿刺活检，二者联合检查能为前列腺癌患者提供更敏感而特异的诊断工具。

　　综上所述，CIP2A有望成为前列腺癌早期诊断、预测复发转移及预后评价的一个重要的生物学指标。联合检测血清中PSA水平更有助为前列腺癌的早期诊治提供依据，为前列腺癌的临床治疗提供新思路。

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　　（收稿日期：2013-10-21 本文编辑：李继翔）